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高效薄層層析板制備步驟和方法

發布時間:2022-07-25瀏覽:124次

  高效薄層層析板是用薄層層析硅膠,用適當的粘合劑充分混合均勻后,經脫氣處理使用進口涂布機械均勻地涂布在潔凈的玻璃板上,晾干后,置于恒溫鼓風干燥箱中經105攝氏度活化半個小時而成。板面平整光潔,薄層均勻牢固,無龜裂、氣泡、掉粉等現象。
  高效薄層層析板的特點以及制備:
  高效薄層層析板就是我們通常所說的硅膠板,要了解制作與操作方法必須先知道:其原理;薄層層析法是一種微量而快速的分析方法,操作容易,設備要求低,但對于每一種被分離的物質都需要各自獨立的方法,TLC主要應用于氨基酸、多肽、糖脂、核苷酸和生物堿類多種物質的分離和鑒定。
  1.樣品的溶解:將薄層層析板樣品溶于展開劑極性相近、揮發性高的有機溶劑。
  2.點樣:控制上樣量,點樣基線距底邊2.0 cm,控制樣點直徑(5 mm)及點間距離(1-1.5 cm),避免因擴散而影響檢測(下圖),點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
  3. 展層:展層容器必須密封,提前加入展開溶劑,使溶劑蒸氣達到平衡。展開劑不能高于上樣點,否則,無法求得Rf值和準確判斷粗產物中各組分在薄層板上的相對位置。
  4. 高效薄層層析板展開劑的選擇條件:有良好的溶解性、使待分離組分間分開、待測組分的Rf值在0.2~0.8之間、不與待測組分或吸附劑發生化學反應、沸點適中,黏度較小、展開后組分斑點圓且集中、混合溶劑用新鮮配制。
  5. 邊緣效應:邊緣效應是樣品在層析時,薄層板兩邊的斑點比中間斑點移動快,并向兩邊偏斜。其原因是用混合溶劑展開時,極性較弱和沸點較低的溶劑在薄層板兩邊沿處較易揮發,使薄層板上的展開劑比例不一,而出現邊緣效應,解決邊緣效應zui有效的方法是剪去薄層板浸入展開劑一端的兩角。

 

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